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PCR Tempo Real e Digital

PCR
A técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction ou Reação em Cadeia da Polimerase) é um método semiquantitativo rápido que possibilita a amplificação in vitro de fragmentos específicos de DNA, partindo-se de uma quantidade mínima de DNA-alvo ou de RNA previamente convertido em cDNA, a fim de obter material suficiente para as diversas análises.
A PCR convencional é baseada na amplificação das sequências alvo seguidas por eletroforese em gel de agarose para visualização dos fragmentos de DNA amplificados e eventualmente sua posterior clonagem. Modelos que executem a ciclagem utilizando gradientes de temperatura permitem otimização de metodologia.
Essa metodologia possui a desvantagem de permitir a detecção dos produtos de reação apenas no final de todos os ciclos de termociclagem.
PCR Tempo real
A técnica de PCR em tempo real gera dados qualitativos e quantitativos. Permite a detecção e amplificação simultaneamente, ciclo a ciclo, com elevada sensibilidade e especificidade da intensidade de fluorescência emitida em decorrência da amplificação da sequência de DNA-¬alvo. O resultado é visualizado em tempo real, gerando dados quantitativos com maior precisão. Isso possibilita a análise comparativa da expressão do gene de interesse entre as amostras logo no início da fase exponencial de amplificação, em que não há saturação da amplificação, eliminando um viés da PCR convencional.
É importante observar que a eficiência das reações de amplificação depende de diversos fatores, como o cuidado nas pipetagens, a qualidade e integridade das amostras (molde de RNA e cDNA), desenho dos primers, condições de termociclagem (temperatura de desnaturação e de anelamento dos primers), qualidade e quantidade dos reagentes e também o tamanho do produto a ser amplificado. Condições específicas para cada experimento devem ser padronizadas.
A técnica é utilizada para detecção de patógenos ou células/sequências específicas em misturas complexas, ou para analisar expressão gênica de um único alvo ou um painel (multiplex).

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RPT09J - Análises Moleculares Rio de Janeiro - Manguinhos - Pavilhão Rocha Lima, sala 320

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P04-027A : Uso do NanoDrop One C Equipamento ou sistema: Nanodrop OneC Rio de Janeiro - IOC

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P04-028B : Detecção molecular de micoplasma em amostras de cultura de células Equipamento ou sistema: Detecção molecular de micoplasma em amostras de cultura de células Rio de Janeiro - IOC

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P04-029A : Utilização do robô de pipetagem EpMotion para placas de 96/384-wells Equipamento ou sistema: Robô de pipetagem - EpMotion Rio de Janeiro - IOC

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P04-028E : Corrida de High Resolution Melting QuantStudio 3 96-wells Equipamento ou sistema: Real-Time PCR - QuantStudio™ 3 Rio de Janeiro - IOC

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P04-031C : Corrida de Microarranjo TaqMan QuantStudio 7 Pro Equipamento ou sistema: Real-Time PCR - QuantStudio™ 7 Pro Rio de Janeiro - IOC

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P04-036A : Verificação da qualidade de amostras de DNA ou RNA através do TapeStation 4150 Equipamento ou sistema: Verificação da qualidade de amostras de DNA e RNA Rio de Janeiro - IOC

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P04-039A : Consultoria científica Equipamento ou sistema: PCR em Tempo Real - Consultoria Rio de Janeiro - IOC

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RPT09A - PCR em Tempo Real Rio de Janeiro - Manguinhos - Pavilhão Leônidas Deane

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RPT09B - PCR em Tempo Real Rio de Janeiro - Manguinhos - Pavilhão de Hanseníase

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RPT09C - PCR em Tempo Real Pernambuco - Recife

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RPT09F - PCR em Tempo Real Rondônia - Porto Velho

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RPT09H - PCR em Tempo Real Paraná - Curitiba

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RPT09K - PCR em Tempo Real Ceará - Ceará

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RPT09D - PCR Tempo Real e PCR digital Minas Gerais - Belo Horizonte

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P04-008A : Corrida de placa pronta QuantStudio12k OpenArray Equipamento ou sistema: Real-Time PCR - QuantStudio™ 12K Minas Gerais - IRR

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P04-007A : Corrida de placa pronta SDS 7500 96-wells Equipamento ou sistema: Real-Time PCR - ABI Prism 7500 Minas Gerais - IRR

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P04-006B : Corrida de placa pronta ViiA7 384 wells Equipamento ou sistema: Real-Time PCR - VIIA 7 Minas Gerais - IRR

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P04-019B : Consultoria com consultor técnico Equipamento ou sistema: Real-Time PCR Minas Gerais - IRR

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